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颠覆传统：无细胞蛋白表达后零处理进行BLI(Biolayer Interferometry)

2025-07-09

近日，365英国上市官方网站收到某知名药企研发团队的反馈：使用两款PLD无细胞蛋白表达试剂盒（PLDK001、PLDK002），成功实现3个蛋白的高效表达，并通过BLI检测无细胞反应后上清快速完成了功能性验证！

生物层干涉术（Biolayer Interferometry, BLI）是一种非标记的、实时监测的先进技术，主要用于生物分子间或是生物分子与小分子间相互作用分析。在蛋白与配体的相互作用检测时，基于传统细胞表达的蛋白样品通常需要经过复杂的细胞破碎、纯化等前处理。然而在本案例中，通过无细胞表达技术获得的重组蛋白，实现了上清液零处理直接BLI检测！

图1 基于传统细胞表达系统的BLI检测与本案例基于无细胞表达（CFPS）的BLI检测流程对比示意图

本案例实验结果可谓亮点纷呈：

高可溶表达：SDS-PAGE清晰显示，3个蛋白在无细胞表达上清液中均呈现强目的条带（图1），传统大肠杆菌系统中易形成的包涵体难题被彻底破解！

图2 三个蛋白在PLDK001、PLDK002试剂盒中表达的SDS-PAGE胶图

低背景：蛋白3经BLI（生物膜层干涉技术）检测显示：带His标签的目的蛋白与背景信号区分度极高（图3），表明表达产物背景干扰小，无需复杂纯化即可直接用于下游结合实验。

图3 BLI通过抗His捕获传感器可从表达上清中捕获蛋白3

强亲和活性：最令人振奋的是——蛋白2与其配体蛋白的BLI实时结合曲线显示典型高效结合特征，表明该蛋白具有强亲和活性！这种无细胞快速表达+BLI快速检测亲和活性的方案，将为药物靶点蛋白筛选贡献新速度。

图4 蛋白2与其配体蛋白有强亲和活性

无细胞蛋白表达技术：推动靶点蛋白开发的“高能引擎”

从基因到蛋白，再到活性验证， 365英国上市官方网站无细胞蛋白表达技术犹如“高能引擎”，推动靶点蛋白极速表达，为药物发现提供“无细胞速度”。对于分秒必争的新药研发，速度即是壁垒，活性就是王道！此次客户的成功实践，完美验证了365英国上市官方网站无细胞表达平台的三重价值：

打破表达壁垒——高难度蛋白轻松可溶表达；
跳过纯化瓶颈——表达上清直通活性检测；
压缩研发周期——将传统数周流程缩短至数天！

对比传统细胞表达系统，365英国上市官方网站无细胞技术在此次案例中展现出压倒性优势：

关键点	细胞表达系统	365英国上市官方网站无细胞表达系统
周期	构建菌株+优化表达，数周至数月	从DNA到蛋白仅需8小时
可溶性	易形成包涵体，需繁琐复性	高可溶表达率
毒性耐受	细胞毒性导致表达失败	无活细胞，表达0限制
下游兼容性	需破碎细胞、多步纯化	上清液直接用于BLI检测